在一定的色譜操作條件下，色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來衡量。一般說來塔板數(shù)愈多，或塔板高度愈小，色譜柱的分離效能愈好。我們來通過實(shí)驗(yàn)告訴大家柱效是如何進(jìn)行評(píng)價(jià)的。
如何對(duì)柱效進(jìn)行評(píng)價(jià)？
1、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
儀器：高xiao液相色譜儀（帶自動(dòng)進(jìn)樣器，或配置微量進(jìn)樣器）、分析天平。
試劑：ben、萘、聯(lián)ben（均為分析純）、甲醇（色譜純）、純凈水。
2、實(shí)驗(yàn)步驟
色譜條件：色譜柱：C18，4.6×150mm，5μm；流動(dòng)相：甲醇-水（80：20，v/v）；
檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。
3、操作步驟
（1）分別精密配制含ben、萘、聯(lián)ben濃度均為約1mg·mL-1的3份對(duì)照品溶液各10mL。
（2）分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋，并定容至刻度，搖勻，得到含ben、萘、聯(lián)ben的混合對(duì)照品溶液。
（3）按照上述色譜條件操作，進(jìn)樣，記錄色譜圖。
計(jì)算各色譜峰的理論塔板數(shù)及各峰間分離度。
如何提高HPLC柱效？
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。以下介紹了幾種國(guó)ji上流行的測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法。
1、提高液相色譜柱柱效的方法
（1）降低移動(dòng)相的流速，但會(huì)使分析時(shí)間延長(zhǎng)。
（2）減少固定相的量，但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。
（3）減小固定相的顆粒度，但不能過分，過分后色譜柱的滲透率也會(huì)減小。
（4）選用低粘度的移動(dòng)相，以利于快速傳質(zhì)，但卻不利于多組份分析。
（5）適當(dāng)提高柱溫，可降低移動(dòng)相的粘度，但柱效和分離度也隨之降低。
（6）盡量減小停滯移動(dòng)相的體積，但卻加快了移動(dòng)相的流速。
從以上介紹可看出，在色譜分析過程中，各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對(duì)柱效值的跟zong測(cè)算，對(duì)自己分析方法不斷的研究和實(shí)踐，才能找到的工作條件。
2、對(duì)柱效值進(jìn)行跟zong測(cè)算應(yīng)注意的問題
我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測(cè)在所有條件下的柱性能，對(duì)大多數(shù)色譜工作者來說，柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力，而有高柱效并不能保證這種分離能力。
不管用什么特定的測(cè)試方法，都會(huì)有幾個(gè)參數(shù)影響柱效的測(cè)定。這些參數(shù)包括：洗脫液的成分和粘度及其線流速，測(cè)定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長(zhǎng)、填料裝填方式、顆粒度，還有所選用的測(cè)量和計(jì)算方法。而測(cè)量和計(jì)算方法對(duì)柱效值的確定起著ji大的作用。
3、幾種測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法
因?yàn)樯V峰是假定樣品濃度在移動(dòng)相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計(jì)算理論塔板數(shù)。因此計(jì)算柱效（以理論塔板數(shù)n為單位）的公式習(xí)慣上定義為：
式中tR為色譜峰的保留時(shí)間;σ2是以時(shí)間為單位測(cè)量色譜峰的偏差;a是和峰高（從測(cè)峰寬的基線量起）有關(guān)的常數(shù),ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點(diǎn)與色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)處做切線與峰底基線相交兩點(diǎn)間的距離。
4、結(jié)論
假如色譜峰真是正態(tài)峰型，那么每種計(jì)算方法都會(huì)得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對(duì)稱峰型的溶質(zhì)，由于柱內(nèi)的槽或空隙，也會(huì)出現(xiàn)非正態(tài)峰型。所以不同的計(jì)算方法將會(huì)得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對(duì)于這些峰型，越在峰的高處測(cè)量，計(jì)算的理論塔板數(shù)值就越大（準(zhǔn)確性越低）。
在許多情況下，色譜工作者需要能反映整個(gè)峰型（包括拖尾）的柱效值,同時(shí)為了保證定量的重復(fù)性，也需要色譜峰很好的對(duì)稱性。這時(shí)對(duì)色譜峰非對(duì)稱性敏感的計(jì)算方法適合。如果目的是要監(jiān)測(cè)色譜柱從di一次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效，那么以上任何一種方法都可以,應(yīng)選擇簡(jiǎn)便的方法。