嘌呤霉素Puromycin
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說明：嘌呤霉素是一種由鏈霉菌中獲取的氨基核苷抗生素，它能抑制真核和原核生物的核糖體上發(fā)生的肽基轉(zhuǎn)移。該抗生素可以作用于革蘭氏陽性菌和各種動物、昆蟲細胞。真菌和革蘭氏陰性菌對其不敏感源于對該抗生素的滲透率較低。但是在一些特別的條件下，嘌呤霉素可作用于大腸桿菌。30多年來，嘌呤霉素作為研究蛋白合成的基本工具被廣泛使用。如今，嘌呤霉素出現(xiàn)被限制詞語更可以用來挑選有該抗生素抑制基因的質(zhì)粒。嘌呤霉素是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu), 能夠同氨基酸結(jié)合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點結(jié)合，并摻入到生長的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點結(jié)合,但是不能參與隨后的任何反應, 因而導致蛋白質(zhì)合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
英文名：Puromycin, dihydrochloride (Stylomycin, P638) from Streptomyces alboniger 包裝：25mg 類別：生化試劑類
CAS:58-58-2
中文名：嘌呤霉素出現(xiàn)被限制詞語
分子式：C22H31N7O5Cl2
分子量 544.43
Purity >98%
mp: 168℃-178℃
最大吸收波長:275 nm & 267nm
性狀：. 溶于水(50mg/ml)銀杏提取物,黃色針狀結(jié)晶,易溶于乙醇,水中不溶。
嘌呤霉素的抗性
Pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶（PAC），被鏈霉菌產(chǎn)生的菌株取代。它位于PUR區(qū)，
這里連接了其他決定嘌呤霉素生物合成途徑的基因。
Pac基因的表達阻礙了嘌呤霉素轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞表達它。在某些特定條件下，嘌呤霉素
亦可用來挑選大腸桿菌的質(zhì)粒中攜帶pac基因的菌株。
篩選條件
嘌呤霉素對大腸桿菌感染性較低，但是在關(guān)于哺乳動物細胞的實驗中很用。在轉(zhuǎn)染實驗中，
它可以替代新霉素系統(tǒng)。
哺乳動物細胞
嘌呤霉素在哺乳動物細胞系反應中的有效濃度范圍從1-10μg/ml。實驗初始，我們建議，
決定實驗中抗生素的最適濃度的方法是首先該濃度可以殺死自身宿主細胞系。
嘌呤霉素可以迅速消滅不含有pac基因的真核細胞。死亡細胞從平板分離，該平板可以用于簡單和初期的轉(zhuǎn)化克隆細胞鑒定。建議篩選哺乳動物細胞的最適濃度應當?shù)陀谒袧舛戎怠?nbsp;
哺乳動物細胞篩選方法
嘌呤霉素常用濃度范圍在1 - 10 μg/ml。等轉(zhuǎn)化出含有pac基因的質(zhì)粒后，細胞在含有嘌呤霉
素的普通培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1. 在轉(zhuǎn)染的48小時內(nèi)，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注意：細胞在快速增殖時，抗生素作用最明顯。如果細胞濃度過大，抗生素產(chǎn)生的效力也會下
降。細胞最好在他們?nèi)诤下什桓哂?5%時分裂最佳。
2.每隔3-4天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3.篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿
主細胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。
4.轉(zhuǎn)移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。這次
富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。
儲存條件和穩(wěn)定性：
嘌呤霉素可在室溫中運輸，收到產(chǎn)品之后應該存放在4℃的環(huán)境中。
嘌呤霉素在室溫條件下可存放3個月，4℃條件下保質(zhì)期一年。為了達到最理想的穩(wěn)定狀
態(tài)和最長的保質(zhì)期，最好存放于-20°C環(huán)境中，保質(zhì)期為2年。
質(zhì)量控制和溶解方法：
HPLC控制，產(chǎn)品純度大于98%。溶解方法，5-50 mg/mL in dH2O, store at -20℃。
注意事項：
嘌呤霉素是一個有毒化合物，小心拿放。
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