近期了解到有實(shí)驗(yàn)人員反應(yīng)，作WB實(shí)驗(yàn)有失敗的情況，懷疑與實(shí)驗(yàn)中使用的緩沖劑有關(guān)，可能是緩沖劑未滅菌或配制成溶液后感染了細(xì)菌導(dǎo)致的。那么WB實(shí)驗(yàn)的失敗是否真的與緩沖劑染菌造成的呢？

WB實(shí)驗(yàn)即western blot蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)，或稱(chēng)為免疫印跡實(shí)驗(yàn)，是將電泳分離后的細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。WB實(shí)驗(yàn)失敗的原因有很多，緩沖劑只是其中一個(gè)影響因素。

緩沖劑長(zhǎng)菌對(duì)WB實(shí)驗(yàn)影響

WB實(shí)驗(yàn)通常是不要求在無(wú)菌條件下操作的，因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)基本不會(huì)受到影響。基本可以確定，WB實(shí)驗(yàn)的失敗不會(huì)是因?yàn)榫彌_劑染菌導(dǎo)致，是其它原因。緩沖劑里即使有殘留的細(xì)菌，其含有的蛋白質(zhì)量是極少的，如果對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響，那么緩沖劑肯定早已經(jīng)嚴(yán)重變質(zhì)了，會(huì)直接注意到而不會(huì)使用。緩沖劑在發(fā)生這么嚴(yán)重的污染之前應(yīng)該早就用完了。

緩沖劑離子強(qiáng)度對(duì)WB實(shí)驗(yàn)影響

緩沖劑未滅菌雖然對(duì)WB實(shí)驗(yàn)不會(huì)造成影響，不過(guò)其離子強(qiáng)度不合適有可能會(huì)造成WB實(shí)驗(yàn)失敗。實(shí)驗(yàn)中通常是采用Tris作為緩沖劑，它有著較低的離子強(qiáng)度，不過(guò)在電泳過(guò)程中，通常會(huì)增加氯化鈉，以提高離子強(qiáng)度加快電泳速率。而離子強(qiáng)度過(guò)高的話(huà)可能造對(duì)蛋白質(zhì)造成影響，使WB實(shí)驗(yàn)失敗。另外也要控制好緩沖劑pH值，這對(duì)WB實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

所以說(shuō)緩沖劑未滅菌或染菌與WB實(shí)驗(yàn)失敗關(guān)系不大，更應(yīng)該考慮緩沖劑的離子強(qiáng)度、pH值是否合適或者樣品制備等問(wèn)題。德晟是生物緩沖劑原料，可大量提供Tris、CAPS、MOPS等緩沖劑原料。